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蜂蜜中糖含量分析方法的确定及问题分析

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浏览:次 2017-05-25 10:01:05

蜂蜜中糖含量分析方法的确定及问题分析 蜂蜜中糖含量分析方法的确定及问题分析 测定蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖适用于该项目的国标有GB/T 22221⑵008和GB/T18932.22⑵003, 实验室没有GB/T18932.22⑵003标准中规定的色谱柱,而GB/T 22221⑵008标准中规定的条件都能满足,就先依照GB/T 22221⑵008标准的方法进行样品前处理和仪器分析。2 实验部份2.1仪器及试剂Waters e2695高效液相色谱仪、2414示差折光检测器;果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖均为分析纯;乙腈,色谱纯;实验用水为Millpore超纯水系统制得,18MΩ•cm,25 ℃2.2仪器分析条件—参照GB/T 22221⑵008标准方法设定色谱柱:CNW Athena NH2(250mm×4.6mm, 5μm);活动相 测定蜂蜜中的果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖
适用于该项目的国标有GB/T 22221⑵008和GB/T18932.22⑵003, 实验室没有GB/T18932.22⑵003标准中规定的色谱柱,而GB/T 22221⑵008标准中规定的条件都能满足,就先依照GB/T 22221⑵008标准的方法进行样品前处理和仪器分析。

2 实验部份2.1仪器及试剂Waters e2695高效液相色谱仪、2414示差折光检测器;果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖均为分析纯;乙腈,色谱纯;实验用水为Millpore超纯水系统制得,18M&Omeg筑巢试验机a;•cm,25 ℃2.2仪器分析条件—参照GB/T 22221⑵008标准方法设定色谱柱:CNW Athena NH2(250mm×4.6mm, 5μm);活动相:乙腈:水=85:15;流速飞机内饰材料水平燃烧试验机:1.0mL/min;进样体积:20μL;色谱柱温度:40℃;检测器温度:40℃2.3 标准溶液的配制分别准确称取1定质量的果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖用水溶解并定容至100mL,配成浓度为5g/100mL的标准储备溶液。由因而条件摸索阶段,因此不急于配制系列标准溶液,先配制1个较高浓度的混合标准溶液(1g/100mL)用齿轮试验机于肯定仪器分析条件和标准曲线范围。3 遇到的问题与分析3.1 仪器分析条件的优化及单标确认依照上述仪器分析方法对浓度为1g/100mL的混合标准溶液进行测定,测定结果见图1。

从图中可以看出,虽然4种糖的混合标准溶液色谱图中对应出现4个色谱峰,但是却存在以下几个问题:(1) 该色谱条件下4种组分的分离时间较长,4种组分完全分离需要近35min,各组分之间的分离度较大,可以尝试进行条件优化,缩短检测时间;(2) 相同浓度下4种组分的出峰响应值相差较大,配制混合标准溶液时可以根据样品中的含量适当下瓦楞纸箱压力试验机降组分1或增加其它组分的浓度;(3) 基线安全鞋耐水解试验机噪音较大,不利于微量组分的分析,对样品的定性和定量都会产生影响针对上述问题,决定先尝试优化仪器分析条件,缩短样品测试时间。混合标准溶液的浓度在色谱柱和仪器的耐受范围内,由因而条件摸索阶段,因此暂时先不调剂,依然采取该浓度的混合标准溶液进行分析。分析条件中采取的是示差检测器,该检测器不允许进行梯度洗脱,要改良分离条件缩短测试时间只能从活动相上做文章,因而尝试通过改变活动相比例进行优化。氨基色谱柱既可以用于正相模式反相模式,又可以用于反相模式,在正相模式下,可以代替硅胶柱使用;在反相模式下可用于碳水化合物的分析,特别适用于糖类分析,本实验即是采取氨基色谱柱的反相模式进行糖类分析。we6阀门试验台试验机00b液晶数显式万能试验机实验中发现微调活动相中有机相的含量,各组分间的分离度有很大的变化。增加乙腈的比例能够提高各组分间的分离度,但测试时间延长;下降乙腈的比例会下降各组分的分离度,但却很大程度上微机控制压剪试验机缩短了测试时间。当活动相为乙腈:水=75:25时,4种糖的测定时间缩短至15 min,同时4种糖具有较好的分离度。

上述测试进程中使用的是4种糖的混合标准溶液,每一个峰对应的待测组分还是未知的,因此在该仪器分析条件下先对各组分进行单标确认。


在单标确认的进程中又发现以下几个问题:(1) 虽然混合标准溶液色谱图中出现了4个完全分离的色谱峰,但是对照单标色老化试验机谱图发现,每一个单标色谱图中都出现了两个峰, 而4min附近色谱峰的峰面积和峰高几近 1致,很有多是溶剂峰;(2) 如果4min附近的色谱峰是溶剂峰,那末4种混合标准数控剥离试验机溶液色谱图中实际上只分离出了3种组分,有1种组分没有出峰或与其他组分的保存时间接近;(3) 对照葡萄糖和麦芽糖的单标色谱图发现,二者的保存时间完全1致,多是操作有误,二者组分在配制或在进样时弄错了。针对上述问题逐1进行排查,由于所用的混合标准溶液是用水配制和稀释的,4min附近的色谱峰是不全自动抗折抗压试验机是是溶剂峰只需进1针水样便可,因此首先以耐碎石冲击试验机纯水为样品进行进样测试,并且重新配制葡萄糖和麦芽糖的标准溶液并测试,配制双滚筒跌落试验机和进样进程及其仔细避免中间环节出错。实验结果表明,4min附近的色谱峰为溶剂峰(见图4),同时重新测定后葡萄糖和麦芽糖的保存时间依然完全1致。


葡萄糖和麦芽糖的保存时间1致,斟酌是不是是仪器分析方法不适合漆包线针孔试验机致使这两种组份没有分离?在前面的实验中发现,微调活动相比例4种糖的保存时间会有很明显的变化,因而尝试通过改变活动相的方式进行分离,但是实验中发现改变活动相二者的保存时间是同步变化的。实验遇阻,就去查资料。百度1下葡萄糖和麦芽糖基本信息和结构(见图5),二者的份子式和结构都有电子卧式拉力试验机很大的差别。然后去查阅文献,发现采取氨基柱分离葡萄糖和麦芽糖的文献其实不少见。看来是人品与技术的问题了。
难道是色谱柱的缘由?色谱柱柱效降落致使二者不能分离?因而更换新的色谱柱再次分离,结果还是没有能够将二者分数显式弯曲强度试验机离。如果葡萄糖和麦芽糖没法分离,实验便没法进行下去,在经过上述尝试以后将问题的矛头指向了所用的试剂。查试剂台账,发现实验室里还有其他品牌分析纯的葡萄糖,而麦芽糖仅此1瓶,但是荣幸的是发现了葡萄糖和麦芽糖的标准品,决低温试验机定使用麦芽糖和葡萄糖的标准品试1下。
实验结果表明,采取分析纯和标准品配制的葡萄糖标准溶液的出峰时间保持1致,而采取分析纯和标准品配制的麦芽糖标准溶液的出峰时间出现了差异。总算是否极泰来找到了问题的关键,看来这次是 “李逵”遇到了“李拉杆耐疲劳试验机鬼”。重新配制4种糖的混合标准溶液,采取上述仪器分析条件进行测定时4种糖得到了较好的分离,因此继续延用上述的仪器分析条件进行后续测定。3.2 溶剂效应的消除4种糖的分离和确认进程基本完成,接下来解决溶剂效应的问题。溶剂效应在液相分析中是1种很常见有时也是很让人头疼的现象,严重的溶剂效应可能会影响到分析结果。溶剂效应产生的缘由和处理方法早有先辈进行过细致的讲授(想了解更多可以参看帖子,这里也不过量的赘述。虽然此次的溶剂效应不会影响定性和定量,但是那“高高再上”的溶剂峰看着很难受,因而想尝试解决或减轻溶剂效应,下降溶剂峰的峰响应。为了减少分析时间,同时减少标准品食品保质期试验机的消耗(麦芽糖的标准品只有0.25g/瓶)决定直接用活动相中的两相(乙腈和水)进行尝试。通过改变乙腈和水的体积比考察溶剂峰的出峰情况。实验发现,在上述色谱条件下以乙腈为样品进行测试时溶剂峰为响应值很大的倒峰;以水为样品进行测试时溶剂峰为响应值很大的正峰;调理二者的比例可以改变溶剂峰的出峰情况,如图7。

从图中可以看出, 试样为70%乙腈和80%乙腈时溶剂峰已变小许多,而以活动相为样品(75%乙腈)时溶剂效应得到了进1步的下降,也就是人们常说的,可以尝试用活动相配制标准溶液或定容样品减轻溶剂效应。因而决定采取活动相配制标准溶液,但是在配制进程中又遇到了困难,高浓度糖的水溶液与乙腈不能互溶,二者会出现明显的分层,如图8(照片拍的不是很清楚,但是可以看到1个分界限)。真是1波还未停息,1波又来侵袭。看来采取活动相配制标准溶液的方式是行不通了,因而适当提高水相的比例,当采取50%乙腈水溶液时,两相没有出现分层,同时测定时有效地下降了溶剂效应,因此在后续的标准溶液配制和样品前处理进程中均采取50%乙腈水溶液。

3.3 基线噪音的消除优化完仪器分析条件并解决了溶剂效应问题以后,接下来就要管材冲击试验机解决基线压溃强度试验机噪音的问题了。液相耐水洗试验机中产生基线噪音的缘由有:(1) 灯能量降落;(2)流通池污染;(3)泵压不稳;(4)气泡等。论坛中关于基线噪音的帖子也很多,许多老师都对基线噪音产生的纸箱抗压强度试验机缘由和消除方法进行过详细的先容,这里仅罗列12。
因而按图索骥,根据论坛中先容的消除基线噪音的方法分别对单向阀、色谱柱、样品池和参比池等进行保护,然后再对混合标准溶液进行测试,结果都没有能够得到理想的色谱图,基线噪音照旧很大。斟酌到前期测定时活动相微调会对样品出峰有很大影响,同时根据示差检测器的检测防护服拉力试验机原理(示差检测器是连续检测样品池和参比池间液体折光指数差值的检测器),该检测器对活动相的变化和温度都很敏感,而实验中活动相都是通过比例阀在线混合的方式进行的,在线混合不但可能致使活动相组成会有微弱的差异,同时乙腈与水的在线混合也可能引发温度的变化,因此尝试采取活动相预先混合的方式,即依照在线混合优化后的比例进行预先配制活动相然落后行测试,采取该方法后基线噪音得到明显改良。关于基线噪音外壳防护等级试验机消除方法将另开1贴进行详细先容。
3.4色谱柱的修复经过上述1系列的优化和测试,蜂蜜中4种糖的测定方法基本肯定,依照终究优化的方法进行样品前处理、绘制标准曲线和分析测定。但是在后期的测试进程中发现,氨基柱的性能降落很快,峰明显变宽,柱效下降,如图10。系统塑料片弯曲试验机适应性测试表明,经过几番测试后氨基柱的柱效只用新柱的约3分之1。
采取随柱说明书(见图11)提供的方法进行保护:先用20扭力试验机倍乙腈冲洗,接着用异丙醇过渡,然后用2氯甲烷冲洗色谱柱,最后再用异丙醇过渡回来,用活动相冲洗、平衡色谱柱落后样分析,测试发现保护后色谱柱性能并没有多大变化。
平时实验中C18色谱柱用的比较多,前期也对C18色谱柱进行过修复实验并获得了很好的效果,此次也决定试1下。因而拆柱,拆开色谱柱后发现氨基柱的前端填料有点塌陷,因而从同款旧柱子的末端取了1些填料进行弥补,同时压力锅试验机对前真个筛板进行了清洗,如图12。经过填料的修补和筛板的清洗,色谱柱的柱效略有提高,但是与新柱相比还是相差甚远。在“液相色谱之家”微信群中和各位老师交换和后期的学习mk9832弯曲试验机进程中了解到:氨基柱是在高纯球形硅胶基质上键合氨丙基团,采取氨基柱分析糖时通常会用到水相,而氨丙基团遇水易水解,从而致使柱效降落。当用到酸性活动相时,活动相p运7试验机H值越低、活动相中水的比例越高越容易产生水解,这类损伤是不可逆的,会致使色谱柱的报废。
4 小结(1)实验中之所以采取分析纯的试剂配制标准储备液是由于前期的准备工作做的不是很充分,储备的标准品种类不全,同时标准品含量太少,不足之前期方法摸索阶段的消耗,因此才门式弹簧拉压试验机会出现麦芽糖的“李逵”和“李鬼”事件;(2)活动相在线混合的方式虽然会引压缩试验机发基线噪音,但是在前期方法摸索阶段,对活动相进行优化时还是方即可行的,可以通过此方法摸索出适合的活动相比例后再采取预混的方法进行测定;(3)此次氨基柱保护和修复的结果都不是很成功,但是使用进程中氨基柱性能降落的问题仍然存在,对氨基柱更好的使用和保护方法还在摸索阶段,其他版友如有良策欢迎共同探讨。

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