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酸(GABA)ELISA试剂盒说明书

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浏览:次 2017-05-31 14:16:04

酸(GABA)ELISA试剂盒说明书 酸(GABA)ELISA试剂盒说明书 酸(GABA)ELISA试剂盒说明书本试剂盒仅供研究使用预期利用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相干液体中γ氨基丁酸(GABA)含量。实验原理本试剂盒利用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中GABA水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中顺次加入GABA抗原、生物素化的抗人GABA抗体、HRP标记的亲和素,经过完全洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的GABA呈正相干。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1. 酶联板:1块(96孔)标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为100ng/ml

酸(GABA)ELISA试剂盒说明书
本试剂盒仅供研究使用

预期利用
ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相干液体中γ氨基丁酸(GABA)含量。

实验原理
本试剂盒利用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本全自动混凝土抗冲磨实验机中GABA水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中顺次加入GABA抗原、生物素化的抗人GABA抗体、HRP标记的亲和素,经过完全洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的GABA呈正相干。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1. 酶联板:1块(96孔)拉扭组合实验机

标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml塑料低温脆性实验机,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度漆包线针孔实验机为100ng/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释成100 ng/ml颗粒强度实验机,50按键曲线实验机 ng/ml ,25 ng/ml,12.5 ng/ml, 6.25ng/ml,3.12 ng/ml, 1.56 ng/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml,临用前15分钟内配制。

如配制50 ng/ml标准品:取0.5ml 100ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀便可,其余浓度以此类推。

2.样品稀释液:1×20ml/瓶。

3.检测稀释液A:1×10ml/瓶。

4.检测稀释液B:1×10ml/瓶。

5.检测溶液A:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释轮毂轴承实验机液A1:100稀释,稀释前根据预先mld10磨料磨损实验机计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100ul),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀600kn液压万能实验机,在使用前1小时内配制。

6.检测溶液B:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。

7.底物溶液:1×10ml/瓶。

8.浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

9.终止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

标本的收集及保存

1.血清:标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 xg离心20分钟,取上清便可检测,或将标本放于⑵0℃保存,但应避免反复冻融。

2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本收集后30分钟内于2 - 8° C 1000 xg离心15分钟,或将标本放于⑵0℃保存,但应避免反复冻融。

注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

操作步骤
实验开始前,请提早配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽可能避免起纱布拉力实验机泡。每次检测都应当做标准曲线。如样品浓度太高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。

1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul,余孔分别加标准品或待测样品100ul,注意不要有气泡速冻实验机,加样将样品加于酶标板孔底部,尽可能不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100ul(取1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前1小时内配制),37耐破强度实验机℃,60分钟。

3.摇摆实验机温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,防尘实验机每次浸泡1⑵分钟,350ul/每孔,甩干。

4.每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100ul,37℃,60分钟。

5.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1⑵分钟安全工用具拉力实验机,350ul/每孔,甩干。

6.依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3⑷孔有明显的梯度兰色,后3⑷孔梯度不明显,便可终止)。

7.依序每孔加终止溶液50ul汽车刹车片剪切实验机,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽可能与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序丈量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后15分钟之内进行检测。

注:

1. 每次实验留1孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是最后加底物溶液及2NH2SO4。丈量时先用此孔调OD值至零。

2.为避免样品蒸发,实验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。

3.未使用完的酶标板或试剂,请于2⑻℃保存。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请根据恒温恒湿吐霜实验机所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。

4. 建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水
纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液最少0.3ml注入孔内,浸泡1⑵分钟,根据需
要,重复此进程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正JGY1000数显式井盖压力实验机式实验进程中。
特异性
本试剂盒可同时检测天然的人GABA,且与其它相干蛋白无交叉反应。

计算
以标准物的浓度为横坐标(对数坐标),OD值为纵坐标(普通坐标),在半对数坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的O插拔寿命实验机D值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项
1. 洗涤进程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。立式万能磨擦磨损实验机

2. 1次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

3. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。

4. 如标本中待测物资含量太高,请先稀释后再测定,计算时请最后乘以电线曲折实验机稀释倍数。

5.在配制标准品、检测溶液工作液时,请以相应的低温脆化实验机稀释液配制,不能混淆。

6.底物请避光保存。

高压防水实验机
检测范围:
1.56 ng/ml ⑴00 ng/ml

说明
1.试剂盒保存:⑵0℃(较长时间不用时);2⑻℃(频繁使用时)。

2.有效期:6个月

3.浓洗涤液会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。

4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少量水样物资,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。

5.中、英文说明书可能会有不1致的地方,请以英文说明书为准。


酸(GABA)ELISA试剂盒说明书

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