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细胞计数及活力的测定操作步骤

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浏览:次 2017-05-23 10:58:19

细胞计数及活力的测定操作步骤 细胞计数及活力的测定操作步骤   1、原理  培养的细胞在1般条件下要求有1定的密度才能生长良好,所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。  在细胞群体中总有1些因各种缘由而死亡的细胞,总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力,由组织中分离细胞1般也要检查活力,以了解分离的进程对细胞是不是有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力,了解冻存和复苏的效果。  用台盼兰染细胞,死细胞着色,活细胞不着色,从而可以辨别死细胞与活细胞。利用细胞内某些酶与特定的试剂产生显色反应,也可测定细胞相对数和相对活力。  2、仪器、用品与试剂  1、仪器与用品:普通显微镜、血球计数板、试管、吸管、酶标仪(或分光光度计)  2、试剂:0.4%台盼兰,0.5%4甲基偶氮唑盐(MTT)、酸化异丙醇  3、材料:细胞悬液  3、操作

  1、原理

  培养的细胞在1般条件下要求有1定的密度才能生长良好,所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。

  在细胞群体中总有1些因各种缘由而死亡的细胞,总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力,由组织中分离细胞1般也要检查活力,以了解分离的进程对细胞是不是有损伤作用。复纸带耐磨实验机苏后的细胞也要检查活力,了解冻存和复苏的效果。

  用台盼兰染细胞,死细胞着色,活细胞不着色,从而可以辨别死细胞与活细胞。利用细胞内某些酶与特定MIT耐折实验机的试剂产生显色反应,也可测定细胞相对数和相对活力。

  23点抗弯实验机、仪器、用品与试剂

  1、仪器与用品:普通显微镜、血球计数板、试管、吸管、酶标仪fzg实验机(或分光光度计)

  2、试剂:0.4%台盼兰,0.5%4甲基盐雾测试实验机偶氮唑铜带拉伸强度实验机盐(MTT)、酸化异丙醇

  3、材料:细胞悬液

  3、操作步骤

  (1)细胞计数

  1、将血球计数板及盖片用擦试干净,并将盖片盖在计数板上。

  电线电缆耐火燃烧实验机2、将细胞悬液吸出少量,滴加在盖片边沿,使悬液充满盖片和计数板之间。

  3、静置3分钟。

  4、镜下视察,计算计数板4大格细胞总数,压线细胞只计左边和上方的防火门实验机。然RT8004微电脑拉力实验机后按下式计算:

  细胞数/ml=4大格细胞总数/4×液晶电子拉力实验机;10000

  注意:镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团占10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。

  (2)细胞活力

  1曲挠实验机、将细胞悬液以0.5ml加入试管中TNSSL立式改变实验机。

  2、加入0.5ml 0.4%台盼兰染液,染色213分钟。

  3、汲取少量悬液涂于载玻片上,加上盖片。

  4、镜下取几个任智能化纸张拉力实验机意视野分别计死细胞和活细胞数,计细胞活力。

  死细胞能润滑油实验机被台盼兰染上色,镜下可见深兰色的细胞,活细胞不被染色,镜下呈无色透冲洗阀寿命实验机明状。

  活力测定可以和细胞计数合起来进行,但要斟酌到染液对原细胞悬液的加倍全自动绝热材料高温测试仪/实验机水泥抗折抗压实验机稀释作用。

  (3)MTT法测细胞相对数和相对活力

  活细胞中的高低温环境疲劳耐久实验机虎魄松江实验机酸脱氢电脑插拔力实验机酶可以使MTT分解产生兰色结晶状甲赞颗粒床垫滚压耐久性实验机积于细胞内和细胞周围。其量与细胞数呈正比,也与细胞活力呈正比。

  l、细胞悬液以1000rpm离心10分钟,弃上清液。

  2、沉淀加入0.5⑴ml M蛇形弹簧疲劳实验机TT,奏乐成悬液。

  3、37℃下保温2数显弹簧拉压实验机小时。

  4、加入4—5 塑料摆锤冲击实验机ml酸化异丙醇(定容)。打匀。

  5、1000 rp单根电线电缆倾斜燃烧实验机m离心,取上清液酶标仪或分光光度计570nm比色,酸化异丙醇调零点。

  注意:MTT法只能测定细胞相对驱动轴周期循环实验机数和相对活力,不能测定细胞绝对数。

  附:1、0.4%台盼兰染液配制:

  台盼兰 0.4克 加双蒸水至100 ml。

  2、MTT配制:

  MTT0安全帽下颏带强度实验机.5克,溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的基础液中。4℃下保存。

  3、酸化异丙醇配制:

  异丙醇中加入H智能门窗保温性能实验机Cl使终究达0.04m钢筋实验机ol/L。

  关键字: 细胞计数

  信息来源:生技网信息中心

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